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4887铁算盘综合资料丁香园论坛


发布日期:2019-10-26 06:25   来源:未知   阅读:

  常用荧光染料(如SYBR Green等)在浓度高的时候会对PC过程产生抑制,所以在荧光定量实验时使用浓度稍低。此时,染料不能占据DNA双链上的所有位置,换句话说:染料与DNA结合是不饱和的。这些染料称为“非饱和染料”。当PCR随着温度上升,双键逐渐解链,染料会从已解开的单链上脱落,然后结合到临近的尚未解链的双链中去继续发荧光。这种现像称作“染料重排”(图1)重排导致在较小的温度变化内,虽然DNA双链的解链过程不同,但荧光值是几乎不变的,也就是说,溶解曲线不能精确反应双链的解链情况。所以 ,对于非饱和染料,其溶解曲线分辨率相对较低,只能区分特异性的产物,不能分辨单碱基的差异。

  与此相对,另外一些荧光染料如LC Green、EvaGreen等,对PCT的过程无抑制(图2),所以在体系中可以高浓度存在。此时,DNA双链中所有可结合位点内都会有染料分子存在,染料与DNA的结合呈饱和状态,所以这种染料称为“饱和染料”。在温度上升,双链解链、染料脱离过程中,未解链的双链部分不存在染料可以结合的位点,染料不能发生重排。所以使用饱和染料制作的溶解曲线分辨率很高,可以精确反映DNA双链随着温度的解链情况,精度可以达到单碱差异的区分(如图3)。也正因此,饱和染料的灵敏度极高,能够真实反映您的qPCR(如图4),这就对您的实验环境要求高,避免污染而产生的一些非特异扩增,同时饱和染料里LC Green价格又高,EvaGreen因其极好的性价比深受大家欢迎。

  美国Biotium公司的 QPCRMix,4887铁算盘综合资料。用的是饱和染料,不会像非饱和染料一样出现"染料重排“现象。使用饱和染料制作的溶解曲线分辨率很高。

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